Рекомендации по технике безопасности и охране труда в биологической лаборатории. Правила работы с биологическими материалами Основные правила при работе медперсонала с кровью
Рассматривать кровь и биологические жидкости пациента, все образцы лабораторных анализов, белье (загрязненное кровью и выделениями пациента) потенциально-инфицированными.
Медработники при поступлении на работу проходят медицинский осмотр с обследованием на сифилис, вирусные гепатиты В, С и ВИЧ-инфекцию. Повторные медосмотр и обследование проводятся согласно нормативных документов.
Медперсонал должен проходить инструктаж по технике безопасности.
Медицинские работники, контактирующие с кровью и биологическими средами (жидкостями), должны быть привиты против вирусного гепатита В.
Медицинские манипуляции, диагностические исследования следует проводить в отведенных для этих целей помещениях.
В рабочих помещениях, где существует риск профессионального заражения, запрещается есть, пить, курить, пользоваться косметикой, брать в руки контактные линзы (в каждом лечебно-диагностическом отделении должны быть помещения для персонала).
Необходимо правильно организовать рабочее место: безопасный, непрокалываемый контейнер необходимо установить на столе или другой поверхности на расстоянии вытянутой руки. Заполнять медицинскую документацию необходимо на чистом столе.
В ходе проведения манипуляций пациенту, персонал не должен вести записи, прикасаться к телефонной трубке и т.п.
В ходе выполнения манипуляции, не следует садиться на постель пациента.
В кабинетах, где проводится инвазивные манипуляции необходимо иметь аварийную аптечку.
При наличии на коже микротравм, экземы и дерматита перед началом рабочего дня необходимо закрывать поврежденные участки лейкопластырем, водонепроницаемыми повязками, напальчниками.
При работе использовать защитную спецодежду (халат, шапочка, сменная обувь) и средства индивидуальной защиты (перчатки, очки, щитки (экраны), маски (респираторы), фартуки). Халат, шапочка должны максимально защищать открытые участки кожи и волосистую часть головы. Сменная обувь, легко моющаяся из нетканых материалов. Перчатки при работе с кровью, биологическими средами, при возможном контакте со слизистыми и поврежденными участками кожи, а также при парентеральных манипуляциях - должны быть из латекса или синтетических материалов, приравненных к латексу. Если при выполнении манипуляций есть вероятность разбрызгивания биологических жидкостей необходимо использовать защитные очки, щитки (экраны), маски, респираторы и фартуки. Средствами индивидуальной защиты персонал должен обеспечиваться в необходимом количестве и соответствующего размера.
Строго соблюдать правила мытья рук и снятия перчаток. Перчатки снятые в процессе проведения манипуляции не использовать повторно.
При загрязнении перчаток кровью и выделениями пациента без их разрыва, во избежание загрязнения рук в процессе их снятия, следует тампоном (салфеткой), смоченным раствором дезинфицирующего средства (или антисептика), снять видимые загрязнения, затем снять перчатки в дезраствор. После снятия перчаток руки обработать антисептиком.
По возможности не прикасаться к инфицированному материалу.
Использовать безопасный, удобный медицинский инструментарий (атравматический) и устройства с защитными приспособлениями (самоблокирующиеся шприцы, вакуумные системы для бесконтактного забора крови и др.).
Осторожно обращаться с острым инструментарием, избегая случайных повреждений:
Осторожно открывать флаконы и ампулы;
Не передавать острые предметы из рук в руки, а через нейтральную зону (лоток);
Не следует надевать колпачок на иглу после инъекции;
Не следует вручную отсоединять иглу, а пользоваться деструктором, иглоотсекателем (пинцетом);
Не следует сгибать или ломать использованную иглу;
Убирать использованный колющий и режущий инструментарий в непрокалываемые контейнеры;
Проводить выемку инструментов после дезинфекции с помощью пинцета, корнцанга;
Упавшие иглы поднимать пинцетом или магнитом.
Забор крови осуществлять иглой со шприцем или вакуумными системами для взятия венозной крови. Пробирки с кровью должны быть закрыты пробками. Перемешивать кровь только в пробирках, закрытых пробкой. Бланк направления в лабораторию не помещать на пробирки с кровью. Пробирки маркировать, а номер ставить в направлении, которое помещается в специальный контейнер отдельно от штатива с пробирками.
Забор анализов мочи, рвотных масс, кала и других биологических сред организма осуществлять в ёмкости с крышками, используя спецодежду, средства индивидуальной защиты и соблюдая технику безопасности. Бланк направления помещать отдельно от ёмкостей с анализами, доставку анализов в лабораторию производить в специальном контейнере.
Предстерилизационную обработку использованного инструментария многократного применения проводить в плотных латексных перчатках или синтетических перчатках приравненных к латексу после предварительной дезинфекции. Работа с медицинскими отходами класса Б и В производится в таких же перчатках.
Смену и сортировку загрязненного белья кровью и биологическими средами, следует проводить в перчатках, маске, халате и шапочке; при сортировке дополнительно использовать фартук. Загрязненное кровью и биологическими жидкостями бельё замачивают в дезрастворе.
При попадании крови или биологических жидкостей на халат (одежду) необходимо снять его и погрузить в дезраствор (халат однократного применения можно продезинфицировать физическими методами, например: паровым) в концентрации соответствующей режиму дезинфекции при вирусных гепатитах.
При попадании крови и биологических жидкостей на поверхность проводят дезинфекцию препаратами, имеющими режимы обеззараживания крови согласно методическим рекомендациям (например: Виркон, Дензибак супер, Хлормикс, Септусин М).
При аварийной ситуации проводить постконтактную профилактику, в том числе экстренную вакцинацию против вирусного гепатита В.
3.1. Соблюдение ТБ в биологической лаборатории.
3.1.1. Инструкция по охране труда для учителя.
3.1.1.1. К работе допускаются лица обоего пола, достигшие 18 лет, имеющие педагогическое образование, прошедшие медицинский осмотр.
3.1.1.2. Учитель должен:
Знать свои должностные обязанности и инструкции по ОТ;
Пройти вводный инструктаж и инструктаж на рабочем месте;
Руководствоваться в работе правилами внутреннего распорядка;
Режим его труда и отдыха определяется графиком работы.
3.1.1.3. Опасность возникновения травм:
При пользовании стеклянной лабораторной посудой;
При работе с колющими и режущими инструментами;
При работе с различными растворами;
При включении электроприборов, аппаратуры ТСО (технических средств обучения);
При работе с инсектицидами;
При наличии в кабинете ядовитых растений.
3.1.1.4. При санитарной обработке растений пользоваться только мыльным и табачным растворами.
3.1.1.5. О случаях травматизма сообщать администрации школы.
3.1.1.6. Соблюдать личную гигиену и технику безопасности.
3.1.1.7. При проведении лабораторно-практических занятий работать в спецодежде (халат, перчатки).
3.1.1.8. Не выращивать в кабинете ядовитые растения.
3.1.1.9. Нести ответственность (административную, материальную, уголовную) за нарушение требований инструкций по ОТ.
3.1.1.10. Не допускать проведения в кабинете занятий по другим предметам и различных внеурочных мероприятий.
Требования безопасности перед началом работы
3.1.1.11. Проверить готовность кабинета и безопасность рабочих мест к учебным занятиям.
3.1.1.12. Проверить наличие необходимого лабораторного оборудования и препаратов.
3.1.1.13. Проверить исправность электроосвещения.
3.1.1.14. Проветрить кабинет.
Требования безопасности во время работы
3.1.1.15. Соблюдать личную гигиену и безопасность.
3.1.1.16. Следить за дисциплиной и порядком в кабинете.
3.1.1.17. Не допускать учащихся к включению и переноске аппаратуры ТСО.
3.1.1.18. Не допускать учащихся к переноске лабораторного оборудования и препаратов.
3.1.1.19. Выдать учащимся рабочую одежду (халаты).
3.1.1.20. Не оставлять учащихся без присмотра во время практических занятий.
3.1.1.21. Осколки стеклянной, фаянсовой посуды убирать щёткой и совком.
3.1.1.22. Следить за санитарно-гигиеническим состоянием кабинета и рабочих мест.
Требования безопасности в аварийных ситуациях
3.1.1.23. В случае возникновения аварийных ситуаций принять меры к эвакуации учащихся.
3.1.1.24. Сообщить о происшедшем администрации школы, при пожаре известить службу 01.
3.1.1.25. При внезапном заболевании учащегося вызвать медработника, сообщить родителям.
Требования безопасности по окончании работы
3.1.1.26. Отключить от электросети аппаратуру ТСО.
3.1.1.27. Проверить уборку рабочих мест.
3.1.1.28. Принять от учащихся рабочую одежду.
3.1.1.29. Перенести в лаборантскую посуду, оборудование и препараты.
3.1.1.30. После экскурсии сверить численность присутствующих учащихся.
3.1.1.31. Проветрить кабинет.
3.1.1.32. Выключить электроосвещение, закрыть кабинет на ключ.
3.1.1.33. Обо всех недостатках, обнаруженных во время учебных занятий, сообщить администрации.
3.1.2. Инструкция по охране труда для учащихся.
Общие требования безопасности.
3.1.2.1. К практическим работам допускаются учащиеся, которые прошли медицинский осмотр, специальное обучение, инструктажи по охране труда, о безопасных методах работы. Эти знания периодически проверяют, закрепляют.
3.1.2.2. Проведение инструктажей и проверка знаний по вопросам техники безопасности (охраны труда) производится в пределах учебной программы и оформляется соответственно в журнале инструктажа.
3.1.2.3. Выполнение данной инструкции является обязательным для всех лиц, которые выполняют практические работы по биологии.
3.1.2.4. Тщательное соблюдение правил личной гигиены и санитарных норм на рабочем месте.
3.1.2.5. В кабинете разрешается проводить эксперименты, только предусмотренные учебными программами. Запрещается выполнять работы, не связанные с заданием или указанием учителя.
3.1.2.6. Надеть спецодежду, застегнуть её на все пуговицы, волосы спрятать под головной убор.
3.1.2.7. Освободить рабочее место от всех ненужных для проведения работы предметов и материалов.
3.1.2.8. Проверить наличие и надёжность посуды, приборов, инструментов, материалов, необходимых для выполнения задания.
3.1.2.9. Начинать выполнять задания только с разрешения учителя.
3.1.2.10. Выполняйте только ту работу, которую поручил учитель.
3.1.2.11. Пользуясь спиртовкой, не задувайте пламя, а гасите его, накрывая специальным колпачком; не вынимайте из спиртовки после её зажигания горелки с фитилём; не зажигайте одну спиртовку от другой - всё это угрожает пожаром.
3.1.2.12. При пользовании скальпелем, лезвием для безопасной бритвы, иглой, никогда не направляйте режущие или колющие части этих инструментов на себя, других людей, чтобы избежать ранений.
3.1.2.13. Нагревая жидкости в пробирке, пользуйтесь только специальным держателем к ней, а не бумажной полоской. Чтобы избежать ожогов, не направляйте отверстие пробирки на себя или на других людей.
3.1.2.14. Пользуясь кислотами или щелочами, наливайте их только в стеклянную посуду. Кислоту вливайте в воду, а не наоборот.
3.1.2.15. При использовании порошкоподобных химических веществ, набирайте их только специальной ложечкой (не металлической), не дотрагиваясь до порошка руками. Помните, что многие из этих веществ ядовиты. То же самое касается удобрений, которые используются для подкормки растений.
3.1.2.16. Все жидкости, которые остаются после проведения лабораторных занятий с использованием химических веществ, сливайте в стеклянные чашки или стаканы, специально для этого предназначенные (не сливайте их в водопроводную раковину).
3.1.2.17. Аккуратно обращайтесь со стеклянной посудой. В случае если она разбивается, не собирайте осколки руками, а сметайте их щёточкой в предназначенный для этого совок.
3.1.2.18. При изготовлении препаратов для рассматривания их под микроскопом очень аккуратно берите стёклышко большим и указательным пальцами правой руки за края, расположите его параллельно предметному стеклу, которое вы держите в левой руке, в непосредственной близости к нему, а потом выпустите стёклышко из пальцев, чтобы оно свободно легло на препарат.
3.1.2.19. Уберите рабочее место.
3.1.2.20. Не мойте стеклянную посуду мылом, она становится скользкой, и её легко упустить и разбить.
3.1.2.21. После окончания работы обязательно тщательно вымойте руки с мылом.
3.1.2.22. Не выходите из кабинета (класса) без разрешения учителя.
3.1.2.23. В случае выявления неисправностей в приборах, установках немедленно остановите работу и оповестите учителя.
3.1.2.24. В случае травмы или ожога сразу же обратитесь к учителю.
3.1.3. Техника безопасности при проведении экскурсий и полевых работ.
3.1.3.1. На экскурсии допускаются учащиеся, прошедшие медицинский осмотр и инструктаж по технике безопасности.
3.1.3.2. Опасность возникновения травм:
При переходе улиц и перекрёстков;
При сборе ядовитых растений;
При сборе ядовитых и опасных насекомых и животных;
При нарушении инструкции по ТБ.
3.1.3.3. У руководителя экскурсии должна быть аптечка, укомплектованная необходимыми медикаментами и перевязочными средствами для оказания первой помощи пострадавшим.
3.1.3.4. Учебная экскурсия не должна превышать заявленного в документах времени.
3.1.3.5. Необходимо знать местные ядовитые растения и опасных ядовитых животных.
3.1.3.6. Иметь запас чистой питьевой воды.
3.1.3.7. Не пользоваться химическими растворами (серный эфир, хлороформ) для замаривания насекомых.
Требования безопасности перед началом занятий.
3.1.3.8. Приготовить необходимые учебные принадлежности (папки, лопатки, булавки, коробки).
3.1.3.9. Внимательно выслушать инструктаж по ТБ при проведении экскурсии.
3.1.3.10. Получить учебное задание у руководителя.
3.1.3.11. Выходить из кабинета спокойно, не торопясь.
3.1.3.12. Одеться соответственно погоде.
3.1.3.13. При жаркой солнечной погоде надеть головной убор.
3.1.3.14. Не начинать движение без указания учителя-руководителя.
Требования безопасности во время занятий.
3.1.3.15. Выполнять все действия только по указанию учителя.
3.1.3.16. Идти только по маршруту, указанному учителем, не нарушая правил дорожного движения при переходе улиц, перекрёстков.
3.1.3.17. Выполнять только работу, определённую учебным заданием.
3.1.3.18. Не делать резких движений, не трогать посторонних предметов.
3.1.3.19. Соблюдать порядок и дисциплину, провести повторную перекличку на месте.
3.1.3.20. Без разрешения учителя никуда не отлучаться.
3.1.3.21. Двигаться компактной группой, не теряя никого из виду.
3.1.3.22. Не пить воду из открытых водоёмов.
3.1.3.23. Не пробовать на вкус собранные растения.
3.1.3.24. Не выкапывать растения незащищёнными руками, пользоваться лопатками.
3.1.3.25. Не ходить во время экскурсии босиком.
Требования безопасности в аварийных ситуациях.
3.1.3.26. При плохом самочувствии сообщить об этом учителю.
3.1.3.27. При резком ухудшении погоды, по указанию учителя, немедленно прекратить занятия, группе вернуться в учебный кабинет.
3.1.3.28. При получении травмы немедленно сообщить о случившемся учителю.
Требования безопасности по окончании занятий.
3.1.3.29. Проверить присутствие всех своих товарищей.
3.1.3.30. Просмотреть свои записи в черновиках по результатам экскурсии. Аккуратно сложить собранный материал в папки, гербарии и т.п. в указанное учителем место.
3.1.3.31. Проверить безопасность рабочего места.
3.1.3.32. Вымыть лицо и руки с мылом.
3.1.4. ТБ при работе с микроорганизмами.
3.1.4.1. Учащиеся должны четко выполнять инструкции учителя к лабораторным занятиям. Учащимся, склонным к аллергическим реакциям или имеющим медицинские противопоказания, запрещается работать с биообъектами без разрешения врача.
3.1.4.2. В лаборатории запрещается принимать пищу, пить напитки.
3.1.4.3. Приступать к занятиям обязательно в хлопчатобумажном халате и одноразовых перчатках.
3.1.4.4. Работу с микроорганизмами проводят только на лабораторных столах с кафельным покрытием.
3.1.4.5. Работу с биологическим материалом проводить специальными инструментами, используя лабораторную посуду. Запрещается трогать культуры руками!
3.1.4.6. При случайном попадании биологического материала (особенно микроорганизмов) на стол или руки, обработать дезинфекцирующим раствором (например, хлорамином).
3.1.4.7. Строго соблюдать правила обращения с химическими реактивами и красителями.
3.1.4.8. Поскольку некоторые микроорганизмы, особенно споры грибов, являются аллергенами, не допускать их распыления: не оставлять открытыми чашки Петри, пробирки, колбы с культурами микроорганизмов. При работе со спорулирующими грибами следует защитить органы дыхания одноразовой защитной маской.
3.1.4.9. Суспензии микроорганизмов или реактивы набирать только с помощью пипетки с насадкой, в наконечник которой вложен ватный шарик для предотвращения засасывания суспензии из наконечника внутрь пипетки.
3.1.4.10. Все предметы, использованные при работе с живыми культурами, должны быть обеззаражены либо обжиганием в пламени горелки (петли, иглы), либо погружением в дезинфицирующий раствор (предметные и покровные стекла, пипетки, шпатели).
3.1.4.11. Все засеянные пробирки, чашки Петри сдаются учителю для помещения в термостат. Отработанный материал (пробирки, чашки Петри) помещается в определенные емкости по указанию учителя для их дальнейшего обеззараживания.
3.1.4.12. В лаборатории необходимо поддерживать порядок и чистоту. По окончании занятий учащиеся обязаны снять защитную одежду, привести в порядок рабочее место и сдать лаборанту или учителю, вымыть руки с использованием дезинфицирующих средств.
3.1.4.13. После окончания работ необходимо проветрить помещение.
3.1.5. Техника безопасности при проведении демонстрационных опытов по биологии.
Общие требования безопасности .
3.1.5.1. К проведению демонстрационных опытов по биологии допускаются педагогические работники в возрасте не моложе 18 лет, прошедшие инструктаж по охране труда, медицинский осмотр и не имеющие противопоказаний по состоянию здоровья. Учащиеся к подготовке и проведению демонстрационных опытов по биологии не допускаются.
3.1.5.2. Лица, допущенные к проведению демонстрационных опытов по биологии, должны соблюдать правила внутреннего трудового распорядка, расписание учебных занятий, установленные режимы труда и отдыха.
3.1.5.3. При проведении демонстрационных опытов по биологии возможно воздействие на работающих следующих опасных и вредных производственных факторов:
Химические ожоги при попадании на кожу и в глаза растворов кислот, щелочей и других едких веществ;
Термические ожоги при неаккуратном обращении со спиртовками;
Порезы и уколы рук при небрежном обращении с лабораторной посудой, режущим и колющим инструментом.
3.1.5.4. Лаборатория биологии должна быть укомплектована медицинской аптечкой с набором необходимых медикаментов и перевязочных средств.
3.1.5.5. При проведении демонстрационных опытов по биологии соблюдать правила пожарной безопасности, знать места расположения первичных средств пожаротушения. Лаборатория биологии должна быть оснащена первичными средствами пожаротушения: огнетушителем пенным и углекислотным, ящиком с песком.
3.1.5.6. О каждом несчастном случае пострадавший или очевидец несчастного случая обязан немедленно сообщить администрации учреждения. При неисправности оборудования, приспособлений и инструмента прекратить работу и сообщить администрации учреждения.
3.1.5.7. В процессе работы соблюдать правила личной гигиены, содержать в чистоте рабочее место.
3.1.5.8. Лица, допустившие невыполнение или нарушение инструкции по охране труда, привлекаются к дисциплинарной ответственности в соответствии с правилами внутреннего трудового распорядка и, при необходимости, подвергаются внеочередной проверке знаний норм и правил охраны труда.
Требования безопасности перед началом работы.
3.1.5.9. Подготовить к работе необходимое оборудование, инструменты, препараты, проверить их исправность, убедиться в целостности лабораторной посуды и приборов из стекла.
3.1.5.10. Тщательно проветрить помещение лаборатории биологии.
Требования безопасности во время работы.
3.1.5.11. При использовании режущих и колющих инструментов (скальпелей, ножниц, препаровальных игл и пр.) соблюдать осторожность, во избежание порезов и уколов брать инструмент только за ручки, не направлять их заостренные части на себя или на других учащихся.
3.1.5.12. Соблюдать осторожность при работе с лабораторной посудой и приборами из стекла. Тонкостенную лабораторную посуду следует укреплять в зажимах штативов осторожно, слегка поворачивая вокруг вертикальной оси или перемещая вверх-вниз. Брать предметные стекла за края легко во избежание пореза пальцев.
3.1.5.13. При пользовании спиртовкой для нагревания жидкостей беречь руки от ожогов. Нагревание жидкостей следует производить только в тонкостенных сосудах (пробирках, колбах и пр.). Отверстие пробирки или горлышко колбы при их нагревании не направлять на себя и на учащихся. При нагревании жидкостей не наклоняться над сосудами и не заглядывать в них.
3.1.5.14. При нагревании стеклянных пластинок необходимо сначала равномерно прогреть всю пластинку, а затем вести местный нагрев.
3.1.5.15. Кипячение горючих жидкостей на открытом огне запрещается.
3.1.5.16. Соблюдать осторожность при работе с влажными и сухими препаратами, не давать учащимся трогать руками и нюхать растения, грибы и колючие растения.
3.1.5.17. При работе с химреактивами не брать их руками, твердые реактивы из склянок набирать специальными ложечками, шпателями.
3.1.5.18. Поддерживать порядок на рабочем месте, не загромождать стол посторонними предметами.
Требования безопасности по окончании работы.
3.1.5.19. Привести в порядок рабочее место, убрать в лаборантскую в шкафы оборудование, приборы, инструменты, препараты, химреактивы.
3.1.5.20. Отработанные водные растворы реактивов слить в закрывающийся стеклянный сосуд вместимость не менее 3 л с крышкой для их последующего уничтожения.
3.1.5.21. Проветрить помещение кабинета и тщательно вымыть руки с мылом.
Требования безопасности в аварийных ситуациях.
3.1.5.22. При разливе легковоспламеняющейся жидкости и ее воспламенении немедленно удалить учащихся из кабинета, сообщить о пожаре администрации учреждения и в ближайшую пожарную часть, приступить к тушению очага возгорания с помощью первичных средств пожаротушения.
3.1.5.23. В случае если разбилась лабораторная посуда или приборы из стекла, не собирать их осколки незащищенными руками, а использовать для этой цели щетку и совок.
3.1.5.24. При получении травмы оказать первую помощь пострадавшему и сообщить администрации учреждения, при необходимости отправить пострадавшего в ближайшее лечебное учреждение.
3.1.6. Техника безопасности для учащихся при работе с микроскопом.
Общие требования.
3.1.6.1. Данная инструкция предназначена для учащихся при выполнении в лаборатории биологии работ, связанных с использованием микроскопа.
3.1.6.2. При работе в лаборатории биологии возможно воздействие следующих опасных и вредных факторов:
Уколы частей тела при небрежном обращении с препаровальными иглами;
Порезы рук при небрежном обращении с предметными и покровными стёклами.
Требования безопасности перед началом работы.
3.1.6.3. Ученик внимательно изучает содержание и порядок выполнения лабораторной работы, безопасные приёмы её выполнения.
3.1.6.4. Все работы выполняются только с разрешения и под контролем учителя.
3.1.6.5. Ученик освобождает рабочее место от посторонних предметов.
3.1.6.6. Ученик повторяет с правила работы с микроскопом.
Требования безопасности во время работы.
3.1.6.7. Ученик должен точно соблюдать порядок действий.
3.1.6.8. Ученик должен соблюдать осторожность при работе с препаровальными иглами, предметными и покровными стёклами.
3.1.6.9. Ученик приступает к работе только тогда, когда убедился в исправности микроскопа.
3.1.6.10. Учащийся не берёт без разрешения учителя биологии микроскоп, препараты и другое оборудование с других рабочих мест.
3.1.6.11. Учащийся не выносит из кабинета микроскоп, предметные и покровные стёкла, препаровальные иглы и пинцеты.
Требования безопасности по окончании работ.
3.1.6.12. По окончании работы ученик собирает предметные и покровные стёкла, препаровальные иглы, пинцеты, протирает салфеткой и укладывает в предназначенные для этого емкости. Затем сдаёт всё учителю на хранение. Протирает объектив и окуляр микроскопа салфеткой, выводит микроскоп из рабочего состояния.
3.1.6.13. По окончании работы ученик приводит своё рабочее место в порядок и сдает лаборанту или учителю.
3.1.6.14. После окончания работы обязательно тщательно вымыть руки с мылом.
Требования безопасности в аварийных ситуациях.
3.1.6.15. В случае выявления неисправностей в приборах и оборудовании следует немедленно остановить работу группы и при необходимости оповестить администрацию.
3.1.7. Памятка по работе с микроскопом с иммерсионным объективом.
Сухие и иммерсионные объективы.
3.1.7.1. Объективы малого увеличения (3 х, 5 х, 8 х, 9 х, 10 х) применяют главным образом для предварительного осмотра препарата. Объективы среднего увеличения (20 х, 40 х, 60 х) – для изучения крупных клеток микроорганизмов (например, грибов). Эти объективы называют сухими, поскольку при микроскопии между фронтальной линзой и препаратом находится воздух. Вследствие различия показателей преломления воздуха (n = 1) и стекла (n = 1,52) часть лучей, освещающих препарат, рассеивается и не попадает в объектив.
3.1.7.2. Объективы больших увеличений (85 х, 90 х) называются иммерсионными. Их применяют для изучения мелких форм микроорганизмов (например, бактерий). При работе с ними препарат должен быть максимально освещен. Светорассеивание, неизбежное при работе с объективами, в данном случае устраняется благодаря использованию иммерсионных жидкостей, показатель преломления которых близок к показателю преломления стекла. Чаще всего используют кедровое масло, у которого n=1,515. Каплю жидкости наносят на препарат и погружают в нее объектив. Короткое фокусное расстояние объективов большого увеличения ((1,9 - 2,1)мм) позволяет исследовать объект, не поднимая объектив из капли, вследствие чего создается однородная среда между линзой и препаратом.
Правила работы с иммерсионной системой микроскопа.
Начало работы.
3.1.7.3. Установить микроскоп на малое увеличение (х8).
3.1.7.4. Навести максимальную освещенность.
3.1.7.5. Установить исследуемый препарат на предметный столик и закрепить его зажимами.
3.1.7.6. Найти изображение предмета на малом увеличении (х8).
3.1.7.7. Нанести на препарат каплю иммерсионной жидкости.
3.1.7.8. Установить микроскоп на большое увеличение (х90) до щелчка.
3.1.7.9. Под контролем глаза микровинтом опустить объектив микроскопа максимально вниз, пока он не коснется иммерсионной жидкости.
3.1.7.10. Наблюдая в окуляр, поднимать макровинтом вверх тубус до тех пор, пока не появится изображение предмета.
3.1.7.11. Микровинтом установить более четкое изображение.
3.1.7.12. Провести микроскопию препарата-мазка.
В связи с ростом заболеваемости ВИЧ-инфекцией и парентеральными гепатитами В и С увеличивается риск инфицирования медицинских работников во время проведения манипуляций в лечебно-профилактических учреждениях.
Заражение медработника чаще всего проходит при загрязнении кожи и слизистых биологическими жидкостями больного (кровь, сыворотка, ликвор, сперма и др.) и травматизации их во время выполнения медицинских манипуляций (порез, укол, повреждение кожи мелкими отломками кости и др.). Риску профессионального инфицирования больше, всего подвергаются медицинские работники, соприкасающиеся с кровью и ее компонентами. В первую очередь, это сотрудники гематологических, реанимационных, стоматологических, гинекологических, хирургических отделений и отделений гемодиализа, процедурных кабинетов, лабораторий, а также на производстве по заготовке крови, ее компонентов и препаратов.
Учитывая возможную инфицированность крови и биологического материала человека вирусами СПИДа, гепатитов, цитомегаловирусами, рядом онкогенных вирусов, правила профилактики профессионального заражения распространяются на все лечебно-профилактические учреждения независимо от профиля. Эти правила сводятся к максимальному предотвращению возможности загрязнения кожи и слизистых.
Всех пациентов необходимо рассматривать как потенциально инфицированных ВИЧ и другими передаваемыми с кровью инфекциями.
Медицинскому персоналу следует выполнять правила безопасности для защиты кожи и слизистых оболочек при контакте с кровью или жидкими выделениями организма любого пациента:
1. Мыть руки до и после любого контакта с пациентом.
2. При осуществлении манипуляций надевать халат, шапочку, сменную обувь, выходить в которых за пределы лаборатории, отделения запрещается.
3. При выполнении парентеральных манипуляций все имеющиеся на руках повреждения кожи должны быть закрыты напальчниками или лейкопластырем.
4. Рассматривать кровь и жидкие выделения всех пациентов как потенциально инфицированные и работать с ними только в перчатках, которые единожды снятые повторно не используются.
5. Сразу после применения медицинский инструментарии помещать в дезинфицирующий раствор, шприцы и катетеры в специальный контейнер для утилизации острых предметов. Никогда не снимать со шприцев иглодержатели с иглами и не производить никаких манипуляций с использованными иглами.
6. Для предотвращения возможного попадания брызг крови и других биологических жидкостей необходимо пользоваться средствами защиты глаз и лица (маска, очки, щитки-экраны и др.)
7. Рассматривать все белье, запачканное кровью или жидкими выделениями, все образцы лабораторных анализов как потенциально инфицированные.
8. Для дезинфекции применять 3 % и 5 % раствор хлорамина (хлорной извести), 6 % раствор перекиси водорода, 70 0 этиловый спирт.
Все рабочие места, где возможно загрязнение кожных и слизистых покровов медицинских работников кровью и другими биологическими жидкостями, должны быть оснащены аптечкой первой медицинской помощи при аварийных ситуациях.
Аптечка должна храниться в легкодоступном для персонала месте. Необходимо следить за сроком годности входящих в перечень средств. Контроль за готовностью аптечки к работе возлагается на старшую медицинскую сестру структурного подразделения. Все рабочие места должны быть оснащены необходимым количеством дезинфицирующих и моющих средств.
При попадании крови и других биологических жидкостей на спецодежду место загрязнения обработать 3 % или 5 % раствором хлорамина, или 6 % раствором перекиси водорода. Затем обработать перчатки, снять халат, свернуть и сдать для проведения полной дезинфекции. При загрязнении рук кровью или попадании ее на лицо следует немедленно обработать тампоном, смоченным 1 % раствором хлорамина или 70 0 этиловым спиртом, вымыть 2-кратно теплой проточной водой с мылом и насухо вытереть индивидуальным полотенцем.
В аварийных ситуациях, связанных с реальной опасностью заражения в стационарах, микробиологических лабораториях,показана экстренная профилактика (превентивное лечение) антибиотиками или химио-препаратами. Ее назначают при особо опасных инфекциях (чума, холера), ВИЧ-инфекции. В зависимости от степени риска парентерального заражения ВИЧ-инфекцией рекомендуется комбинация 3 препаратов или одного азидотимидина в течение 4 недель.
Важно начинать экстренную профилактику в первые 24 часа после заражения!
Во время вспышки гриппа и других ОРЗ с целью экстренной профилактики показано назначение иммуномодуляторов (иммуностимуляторов) - дибазола, арбидола, а также препаратов, оказывающих вирулицидное действие (ремантадин и др.).
Иммунокорректоры показаны и вне сложных эпидемиологических ситуаций медицинским работникам с иммунодефицитами.
Основные направления разработки программы профилактики внутрибольничной инфекции (ВБИ) у медицинского персонала:
Скрининг медицинского персонала на наличие инфекции:
При приеме на работу,
В плановом порядке,
По эпидемиологическим показаниям.
Разработка критериев:
Приема на работу,
Отстранения от работы,
Ограничения профессиональной деятельности.
Определение профессиональных факторов риска и групп риска в каждом стационаре.
Разработка стандартной технологии выполнения лечебных и диагностических процедур.
Вакцинация медицинского персонала.
Организация диспансерного обследования медицинского персонала:
Выявление и учет заболеваний на основе определения стандартного случая ВБИ,
Определение критериев профессиональных заражений ВБИ,
Лечение профессиональных и непрофессиональных инфекционных заболеваний,
Создание базы данных о заболеваемости персонала и проведенных мероприятиях.
Определение обязанностей администрации больницы и необходимых ресурсов.
Обучение персонала разных типов ЛПУ:
Среднего звена,
Младшего персонала.
При работе с патологическим материалом, содержащим микробы, и особенно при культивировании патогенных микробов во избежание заражения персонала лаборатории необходимо соблюдать правила техники биологической безопасности. В зависимости от степени патогенности и контагиозности возбудителей принято выделять четыре уровня биологической опасности и соответствующих мероприятий, необходимых для предупреждения заражения в лаборатории.
Первый уровень (работа с непатогенными микроорганизмами). Необходимо соблюдение стандартных правил (см. тему 1.1).
Второй уровень (работа с низковирулентными микроорганизмами). К числу дополнительных правил и мероприятий относятся использование лабораторной одежды и защитных перчаток; обязательное обеззараживание всех загрязненных отходов; ограничение доступа в лабораторию. Для предотвращения попадания микробов в воздух рабочего помещения выполнение механических манипуляций, сопряженных с высокой вероятностью распыления микроорганизмов, необходимо осуществлять в специализированных закрытых легкодезинфици-руемых настольных боксах.
Третий уровень (работа с высоковирулентными микроорганизмами). К числу дополнительных правил и мероприятий относятся использование специальной защитной лабораторной одежды; контроль доступа в лабораторию. Все манипуляции с патологическим материалом необходимо осуществлять в специализированных боксах.
Четвертый уровень (работа с возбудителями ООИ). Работа с возбудителями особо опасных инфекций (ООИ) разрешена исключительно в специализированных режимных лабораториях,
Имеющих оборудование, необходимое для эффективной защиты от патогенных микробов, их контроля и уничтожения. К числу дополнительных правил и мероприятий относятся наличие отдельных помещений для смены лабораторной одежды и душевых, обязательное обеззараживание всех отходов лаборатории. Все манипуляции с патологическим материалом необходимо осуществлять в специализированных настольных боксах, снабженных системами стерилизации воздуха (см. тему 7.1).
■ ОЦЕНКА РЕЗУЛЬТАТОВ КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКИХ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ
Обнаружение патогенных микроорганизмов, являющихся возбудителями заболеваний (например, микобактерии туберкулеза, гонококки и др.), имеет решающее значение для постановки диагноза.
Выявление роли условно-патогенных микроорганизмов в этиологии и патогенезе заболеваний должно быть основано на строгой аргументации. Обязательным условием является клиническое, эпидемиологическое, микробиологическое и серологическое исключение возбудителей инфекционных болезней (например, возбудителей кишечных инфекций, венерических болезней и др.). Для оценки роли условно-патогенных микроорганизмов в патологии могут быть использованы следующие критерии.
1. Выделение микроорганизмов из крови, спинномозговой жидкости или других жидкостей организма, которые в норме у здоровых людей являются стерильными.
2. Обнаружение в исследуемом материале, особенно при дисбактериозах, условно-патогенных микроорганизмов в достаточно больших количествах (например, 10 5 -10 7 микробных клеток в 1 мл). Для этого проводят количественное определение микроорганизмов по числу КОЕ в 1 г или 1 мл испытуемого образца. Эти количественные показатели могут варьировать в зависимости от вида микроорганизмов, типа исследуемого материала, характера и стадии заболевания.
3. Повторное, многократное (в течение суток или через сутки) выделение одного и того же микроорганизма из одного и того же материала от больного (например, из крови при сепсисе и т.д.).
4. Обнаружение идентичных условно-патогенных микроорганизмов в разных образцах материала (например, при пищевых токсикоинфекциях - в промывных водах желудка, рвотных массах, испражнениях, пищевых продуктах).
5. Нарастание титра антител в 4 раза и более в парных сыворотках крови больного в отношении условно-патогенного микроорганизма, который предполагается как возбудитель дан-
ного патологического процесса. В ряде случаев рекомендуется использовать в качестве антигенов аутоштаммы микроорганизмов, выделенные от больных.
6. Положительные кожно-аллергические реакции у больных с аллергенами, приготовленными из условно-патогенных микроорганизмов.
7. В случае внутрибольничных (нозокомиальных) инфекций - выделение идентичных культур микроорганизмов от группы больных.
8. Совпадение данных лабораторного определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам с эффективностью антимикробной терапии в клинических условиях, подтверждаемое улучшением состояния больного и уменьшением количества или элиминацией соответствующих микроорганизмов.
9. Условно-патогенные микроорганизмы (синоним: оппортунистические) представляют собой большую группу микроорганизмов, занимающих различное систематическое положение. Они встречаются среди аэробных и анаэробных бактерий, грибов, простейших. В клинической микробиологии наиболее часто встречаются условно-патогенные микроорганизмы, относящиеся к родам Staphylococcus, Streptococcus, Escherichia, Klebsiella, Proteus, Entewbacter, Citrobacter, Serratia, Pseudomonas, Haemophilus, Bacteroides, Veillonella, Vibrio, Peptococcus, Peptostreptococ-cus, Mycobacterium, Mycoplasma, Candida и др.
■ ОФОРМЛЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ЛАБОРАТОРНЫХ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ
Результаты лабораторных исследований оформляют на специальных бланках, которые передают лечащему врачу.
1. В ответе прежде всего указывают наличие патогенных, а также условно-патогенных микроорганизмов, обнаруженных при микробиологическом исследовании. Сообщают также данные лабораторного определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам.
2. При обнаружении микробных ассоциаций перечисляют все микроорганизмы, указывают доминирующие виды и количественные микробиологические показатели.
3. В соответствии с правилами международной номенклатуры в ответах приводят видовые названия микроорганизмов, например: Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa и т.д.
4. С целью ускорения лабораторных исследований в ряде случаев при выделении условно-патогенных микроорганизмов вполне допустимо в ответе ограничиться указанием только родовой принадлежности обнаруженных микроорганизмов, например Proteus sp., Candida sp. и т.д.
Аэробные бактерии Грамположительные бактерии
Chryseobacterium indologenes Chryseobacterium meningosepticum Enterococcus faecalis и другие виды Enterococcus Erysipelothrix rhusiopathiae Staphylococcus aureus Staphylococcus epidermidis Staphylococcus saprophiticus и другие виды Staphylococcus Streptococcus pyogenes Streptococcus agalactiae
Грамотрицательные бактерии
Burkholderia cepacia Citrobacter koseri Edwardsiella tarda Eikenella corrodens Enterobacter spp. Escherichia coli Haemophilus influenzae Klebsiella spp. Listeria monocytogenes Moraxella catarrhalis Proteus vulgaris Proteus mirabilis Pseudomonas aeruginosa Pseudomonas putida Pseudomonas fluorescens Salmonella enterica
подвид enterica биовар typhimurium Serratia spp. Spirillum minus Streptobacillus moniliformis Vibrio vulnificus
Анаэробные бактерии
Неспорообразующие грамотрицательные анаэробы
Bacteroides fragilis
и другие виды рода Bacteroides
Prevotella melaninogenica
и другие виды рода Prevotella
Porphiromonas spp.
Fusobacterium spp.
Veilonella spp.
Неспорообразующие грамположительные анаэробы
Peptostreptococcus spp. Propionibacterium acnes
Спорообразующие грамположительные анаэробы
Clostridium perfringens Clostridium novyi Clostridium septicum Clostridium histolyticum Clostridium ramosum Clostridium sporogenes Clostridium tetani
Бактерии, перечисленные выше, вызывают гнойно-воспалительные процессы различной локализации, в том числе ангины, фурункулы, циститы и пиелиты, плевриты, перикардиты, сепсис и др. Многие из этих возбудителей встречаются в нормальной микрофлоре человека и проявляют свою патогенность только при нарушении нормальной экологии.
Стафилококки, стрептококки, протей, эшерихии и анаэробные бактерии нередко вызывают смешанную инфекцию как в разнообразных сочетаниях между собой, так и с другими микроорганизмами - вирусами, грибами.
Тема 12.1. АЭРОБНЫЕ БАКТЕРИИ -ВОЗБУДИТЕЛИ ГНОЙНО-ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ И РАНЕВЫХ ИНФЕКЦИЙ
▲ Программа
1. Биологические свойства возбудителей гнойно-воспалительной и раневой инфекции, их патогенность, экология, особенности инфекции и эпидемиология вызываемых заболеваний.
2. Микробиологическая диагностика.
3. Диагностические препараты, профилактические и лечебные препараты.
А Демонстрация
1. Рост а- и р-гемолитических стрептококков на кровяном агаре.
2. Рост и образование пигмента P.aeruginosa на агаре.
3. Диагностические и лечебно-профилактические препараты.
ЗАНЯТИЕ 1
▲ Задание студентам
1. Микроскопировать и зарисовать мазки из чистых культур возбудителей гнойных инфекций: S.aureus, S.pyogenes, P.aeruginosa, E.coli, P.vulgaris. Окраска по методу Грама.
2. Микроскопировать и зарисовать мазки из гноя, содержащие возбудителей: стафилококков, стрептококков. Окраска по методу Грама.
3. Ознакомиться с питательными средами, применяемыми при микробиологической диагностике гнойных и раневых инфекций. Указать назначение отдельных питательных сред.
4. Микробиологическое исследование при раневых и гнойных инфекциях:
а) указать материал, подлежащий исследованию;
 |
 |
б)
микроскопический метод: микроскопировать мазок
из гноя, окраска по методу Грама. Сделать вывод;
в) наметить план дальнейшего исследования.
ЗАНЯТИЕ 2
Задание студентам
1. Микробиологическое исследование гноя:
а) учесть результат посева гноя на кровяной агар в
чашке Петри, описать подозрительные колонии,
отметить наличие гемолиза, составить план даль
нейшего исследования;
б) учесть результаты определения лецитиназы и плаз-
мокоагулазы у выделенной культуры стафилококка.
Сделать вывод;
в) учесть результаты определения чувствительности
культуры стафилококка к антибиотикам. Сделать
вывод.
2. Микробиологическое исследование мочи. Определить количество бактерий в 1 мл мочи по результатам метода секторных посевов. Дать заключение.
3. Серодиагностика ревматизма. Ознакомиться с описанием стрептолизиновой реакции. Внести в протокол результаты определения анти-О-стрептолизина в сыворотке крови больного. Сделать вывод.
4. Дать краткую характеристику демонстрируемым антимикробным, диагностическим и лечебно-профилактическим препаратам.
Методические указания
Материал для исследования: раневое отделяемое, гной, экссудат, моча, мазки со слизистых оболочек (носоглотки, зева и др.), кровь при подозрении на сепсис.
Микробиологическая диагностика стафилококковых инфекций МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:
Бактериоскопическое исследование (схема 12.1.1). Из исследуемого материала (за исключением крови) готовят мазки для первичной бактериоскопии, окрашивают по методу Грама и микроскопируют. Наличие в препаратах грамположительных кокков, располагающихся в виде гроздевидных скоплений (рис. 12.1.1; на вклейке), позволяет поставить предварительный диагноз стафилококковой инфекции. Следует иметь в виду, что в патологическом материале стрептококки редко образуют типичные скопления, чаще располагаются поодиночке или небольшими группами по 2-3 бактерии.
Бактериологическое исследование. Испытуемый материал засевают петлей на чашки с кровяным и желточно-солевым агаром
Рис. 1.4. Культура дрожжей Sac--charomyces cerevisiae при разных методах микроскопии К с. 14. а - микроскопия мазка, окрашенного метиленовым синим; б - тем-нопольная микроскопия; в - фазо-во-контрастная микроскопия- г - люминесцентная микроскопия. Окраска корифосфином.
Рис.2.2.1. Смесь стафилококков и кишечных палочек. К с. 23. Окраска по методу Грама.
 |
 |
Рис.3.2.1. "Пестрый ряд". К с. 46.
а - ферментация углевода до кислоты и газа; б - отсутствие ферментации;
в - образование индола; г - образование сероводорода.
Рис.6.2. Постановка опыта специфической трансдукции (схема).Я" с. 26
пп™Ь Г i dga " ; б ~ реципиент E - coli 1ас "; в - Рост колоний реципиентного „» рп Т^- ВДо; г *" ^Раженная транслирующим фагом X dgal культура b.coli lac ; д - рост колоний трансдуктантов (красного цвета), несущих ген gal, на среде Эндо.
Рис.6.1. Постановка опыта трансформации. К с. 68. контает С пе?™г5 НК " в ™ еленно? из B.subtilis; б - реципиент B.subtilis; в -
селенной с^Л ЫХ ба,СГерИЙ С ДНК; Г ~ рост колоний Рекомбинантов на штамма н L?™ со й С1 Р ептоми «ином; д - отсутствие роста реципиентного 1мма на селективной среде со стрептомицином; е - рост колоний реципиентного штамма на среде без стрептомицина.
 |
Рис.6.3. Постановка опыта по конъюгации. К с. 70. а - рост колоний бактерий донора на минимальной среде без стрептомицина; б - рост колоний рекомбинантов на селективной среде со стрептомицином без лейцина; в - рост колоний бактерий реципиентов на полной среде со стрептомицином и лейцином; г - отсутствие роста бактерий донора на среде со стрептомицином; д - донор-культура E.coli F , lei , su 5 ; е - контакт между бактериями донора и реципиента; ж - реципиент-культура E.coli F", lei", st/; з - отсутствие роста бактерий реципиента на селективной среде со стрептомицином без лейцина.
 |
 |
Рис. 12.1.1. Staphylococcus aureus и Streptococcus pyogenes в гное. Окраска по методу Грама. К с. 160.
Рис. 12.2.1. Clostridium perfringens в отечной жидкости. К с. 174.
Рис.19.1.1. Тельца Бабеша -Нег-ри в нейронах гиппокампа. Срез головного мозга человека. К с. 305. Окраска по методу Романовского - Гимзы.
(ЖСА) для получения изолированных колоний. Посевы инкубируют при 37 °С в течение суток. На следующий день исследуют выросшие колонии на обеих средах. На кровяном агаре отмечают наличие или отсутствие гемолиза (рис. 12.1.2; на вклейке). На ЖСА S.aureus образует золотистые круглые выпуклые непрозрачные колонии. Вокруг колоний стафилококков, обладающих ле-цитиназной активностью, образуются зоны помутнения с перламутровым оттенком. Для окончательного установления вида стафилококка 2-3 колонии пересевают в пробирки со скошенным питательным агаром для получения чистых культур с последующим определением их дифференциальных признаков (табл. 12.1.1).
Таблица 12.1.1. Дифференциальные признаки стафилококков
| Вид |
| S.aureus |
| S.sapro-phyticus |
S.epider-midis
Образование:
плазмокоагулазы + - -
лецитиназы + - -
альфа-токсина + - -
Ферментация:
глюкозы + + -
маннита в анаэробных условиях + - +
Чувствительность к новобиоцину S S R
Условные обозначения:(+) - наличие признака; (-) - отсутствие признака; S - чувствительный; R - резистентный.
Для постановки реакции на плазмокоагулазу плазму крови, разведенную в 2 раза, разливают по 0,4 мл в пробирки, вносят туда по одной петле каждой исследуемой культуры стафилококка и помещают в термостат при 37 °С. Через 2, 4 и 24 ч отмечают результаты опыта. При наличии плазмокоагулазы образуется сгусток. В некоторых случаях наряду с плазмокоагу-лазой и лецитиназой определяют фибринолизин, гиалуронидазу, ДНКазу.
Для установления источника внутрибольничной инфекции выделяют чистые культуры стафилококка от больных и бактерионосителей, после чего проводят их фаготипирование с помощью набора типовых бактериофагов. Фаги разводят до титра, указанного на этикетке. Каждую из исследуемых культур засевают на питательный агар в чашку Петри газоном, высушивают, а затем петлей каплю соответствующего фага наносят на квадраты (по числу фагов, входящих в набор), предварительно размеченные карандашом на дне чашки Петри. Посевы инкубируют при 37 "С. Результаты оценивают на следующий день по наличию лизиса культуры (см. рис. 5.3.2).
Определение чувствительности стафилококка к антибиотикам - см. тему 7.2.
Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохимические и молекулярно-биологические исследования.
Иммунохимические исследования. Основаны на обнаружении антигенов (токсинов и ферментов) возбудителя в материале от больного с помощью чувствительных серологических реакций.
Биохимические и молекулярно-биологические исследования. Исследуемый материал, полученный из очага инфекции, используют для обнаружения ДНК возбудителя с помощью ПЦР. В случае обнаружения соответствующих молекул можно поставить предварительный диагноз.
Микробиологическая диагностика стрептококковых инфекций (схема 12.1.2)
МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:
Бактериоскопическое исследование. Мазки для первичной бактериоскопии готовят из патологического материала (за исключением крови), окрашивают по методу Грама и микроско-пируют. При положительном результате обнаруживают цепочки грамположительных кокков (см. рис. 12.1.1). Следует иметь в виду, что в патологическом материале стрептококки редко образуют типичные скопления, чаще располагаются поодиночке или небольшими группами по 2-3 бактерии.
Бактериологическое исследование. Исследуемый материал засевают на кровяной агар в чашку Петри. После инкубации при 37 "С в течение 24 ч отмечают характер колоний и наличие вокруг них зон гемолиза. Из части материала, взятого из колоний, готовят мазок, окрашивают по методу Грама и микро-скопируют. Для получения чистой культуры 1-3 подозрительные колонии пересевают в пробирки со скошенным кровяным агаром и сахарным бульоном. На кровяном агаре Streptococcus pyogenes образует мелкие, величиной с булавочную головку, мутноватые круглые колонии. В бульоне стрептококк в отличие от стафилококка дает придонно-пристеночный рост в виде хлопьев или зерен, оставляя среду прозрачной.
По характеру гемолиза на кровяном агаре стрептококки делятся на три группы: 1) негемолитические; 2) aj-гемолитические, или зеленящие, образующие зеленоватую зону частичного гемолиза; 3) р-гемолитические, образующие вокруг колонии полностью прозрачную зону гемолиза.
Заключительным этапом бактериологического исследования является идентификация выделенной культуры по антигенным свойствам (табл. 12.1.2). Серогруппу стрептококков определяют в реакции преципитации с экстрактом из исследуемой культуры (полисахаридным преципитиногеном С) и группоспецифи-
 |
ческими сыворотками (обычно 4 наиболее распространенные серогруппы - А, В, С и D). Развернутое серологическое исследование и типирование стрептококков проводят главным образом для эпидемиологического обследования.
Таблица 12.1.2. Дифференциальные признаки стрептококков
| Вид | Рост при | Рост на средах, содержащих | желчь (40%) | |
| 10"С | 45 °С | метиленовый синий (0,1 %) | хлорид натрия (6,5 %) |
Министерство образования и науки Российской Федерации
Негосударственное образовательное учреждение
Высшего профессионального образования
«Самарский медицинский институт «РеаВиЗ»
Нормальная физиология с основами анатомии
Для студентов фармацевтического факультета
Лабораторный практикум
Самара
Все лабораторные (практические) работы выполняются по единой схеме, позволяющие сделать правильные выводы по проводимому исследованию.
План проведения конкретного исследования всегда включает одни и те же разделы:
1. Тема исследования.
2. Цель исследования.
3. Материально-техническое обеспечения исследования (что необходимо).
4. Название работы.
5. Цель работы.
6. Что необходимо для проведения работы
7. Ход работы.
8. Результаты.
9. Обсуждение и выводы.
Организация и правила выполнения лабораторных (практических) занятий
Программа обучения студентов по курсу «Нормальная физиология с основами анатомии» требует от студентов выполнения определенных правил по технике безопасности при работе с животными, колюще-режущими инструментами, электрооборудования, химическими реактивами и биологическими жидкостями.
Чтобы проведение учебных занятий проходило безопасно необходимо выполнять следующие требования:
1. выполняются правила техники безопасности;
2. соблюдается дисциплина, тишина, порядок и чистота на рабочих местах;
3. все студенты имеют рабочую одежду (шапочки, халаты, резиновые перчатки);
4. каждая работа начинается с подробного объяснения методики ее выполнения и получения разрешения преподавателя;
5. назначается дежурный (из группы студентов), который следит за подготовкой необходимого материала и оборудования, для выполнения конкретной темы, при необходимости проветривает помещение, включает и выключает воду и электричество.
Работа с кровью или другими биологическими жидкостями
Для профилактики инфицирования студент должен соблюдать следующие правила:
1. Использование защитных средств и методик, острожное обращение с колюще-режущими инструментами.
2. Необходима специальная медицинская одежда (халат, шапочка, резиновые перчатки), которую при загрязнении кровью нужно менять незамедлительно.
3. Острые инструменты (иглы, скальпели, ножницы и др.) рассматриваются как потенциально инфицированные.
4. Студенты с травмами (ранами) на руках, экссудативным поражением кожи, мокнущими дерматитами отстраняются от контакта с кровью, а также с колюще-режущими инструментами.
5. При манипуляциях, предусматривающих контакт с кровью, тканями и биологическими жидкостями, обязательно использовать перчатки. После завершения работы руки следует вымыть. Не рекомендуется дважды использовать перчатки.
6. При возможном разбрызгивании крови или других биологических жидкостей следует использовать хирургические маски, очки или защитные экраны.
7. Весь медицинский инструментарий (а также посуда, белье, аппараты и др.), загрязненный кровью или другими биологическими жидкостями, а также соприкасающийся со слизистыми оболочками, сразу после использования подлежит дезинфекции в соответствии с приказами Министерства здравоохранения и социального развития РФ и другими нормативными документами. Применяемые для проведения работ материала (вата, бинты) обеззараживают согласно этим же приказам с последующей утилизацией.